Multiplex Dijital PCR (dPCR), moleküler biyoloji alanında önemli bir ilerlemeyi temsil eder ve geleneksel Polimeraz Zincir Reaksiyonuna (PCR) göre belirgin avantajlar sunar. Multiplex Dijital PCR çözümlerinin tedarikçisi olarak, bu iki teknoloji arasındaki farkları araştırmaktan ve Multiplex Dijital PCR'nin masaya getirdiği benzersiz faydaları vurgulamaktan heyecan duyuyorum.
Geleneksel PCR ve Multipleks Dijital PCR'nin Prensipleri
Geleneksel PCR, spesifik DNA dizilerini amplifiye etmek için kullanılan köklü bir tekniktir. Primerler, DNA polimeraz ve nükleotidler kullanılarak hedef DNA'nın üstel amplifikasyonuna dayanır. Reaksiyon tek bir tüpte meydana gelir ve amplifikasyon gerçek zamanlı olarak veya son noktada izlenir. Amplifiye edilmiş DNA miktarı, floresan sinyalinin önceden tanımlanmış bir eşiği geçtiği döngü sayısı olan gerçek zamanlı PCR'deki döngü eşiği (Ct) değerine göre tahmin edilir.
Öte yandan Multiplex Digital PCR, numuneyi binlerce veya milyonlarca bireysel reaksiyona böler. Her bölme bağımsız bir mini reaksiyon odası görevi görür. Numune, bazı bölümlerin hedef DNA molekülünü içerecek, diğerlerinin ise içermeyeceği şekilde seyreltilir. Amplifikasyonun ardından bölümler, hedef DNA'nın varlığını veya yokluğunu belirlemek için analiz edilir. Pozitif ve negatif bölümlerin sayısı sayılarak hedef DNA'nın mutlak miktarı Poisson istatistikleri kullanılarak hesaplanabilir.
Hassasiyet ve Hassasiyet
Multiplex Dijital PCR ile geleneksel PCR arasındaki en önemli farklardan biri hassasiyet ve hassasiyetinde yatmaktadır. Geleneksel PCR yarı kantitatiftir, yani hedef DNA'nın yalnızca göreceli kantifikasyonunu sağlayabilir. Ct değeri PCR reaksiyonunun etkinliği, örneğin kalitesi ve inhibitörlerin varlığı gibi çeşitli faktörlerden etkilenir. Bu, özellikle farklı kaynaklardan veya deney koşullarından alınan örnekleri karşılaştırırken sonuçlarda değişkenliğe yol açabilir.
Ancak Multiplex Digital PCR mutlak ölçüm sunar. Pozitif ve negatif bölümlerin sayısını saydığından reaksiyon veriminden etkilenmez. Bu, düşük hedef konsantrasyonlarında bile son derece hassas olmasını sağlar. Örneğin nadir mutasyonların tespiti veya düşük bolluktaki transkriptlerin ölçülmesi gibi uygulamalarda Multiplex Digital PCR, geleneksel PCR tarafından gözden kaçabilecek hedefleri tespit edebilir.
Çoğullama Yeteneği
Bir diğer önemli fark ise çoğullama yeteneğidir. Geleneksel PCR tipik olarak tek bir reaksiyonda yalnızca bir veya birkaç hedefi çoğaltabilir. Bunun nedeni, farklı hedefler için kullanılan primerlerin ve probların birbirlerine müdahale edebilmesi ve spesifik olmayan amplifikasyona veya verimin azalmasına yol açabilmesidir.
Multiplex Digital PCR, adından da anlaşılacağı gibi, tek bir reaksiyonda birden fazla hedefi aynı anda tespit edebilir. Bu, her hedef için farklı floresan boyalar kullanılarak elde edilir. Daha sonra her bölüm, floresans sinyaline dayalı olarak farklı hedeflerin varlığı açısından analiz edilebilir. Bu çoğullama yeteneği, birden fazla hedefin aynı anda tespit edilmesi gereken gen ekspresyonu profili oluşturma, patojen tespiti ve kanser biyobelirteç analizi gibi uygulamalarda özellikle faydalıdır.
İnhibitörlere Karşı Tolerans
Geleneksel PCR, numunedeki inhibitörlerin varlığına karşı oldukça duyarlıdır. İnhibitörler PCR reaksiyonunun etkinliğini azaltarak yanlış negatif sonuçlara veya hatalı ölçüme yol açabilir. Bu inhibitörler kan, doku veya çevresel numuneler gibi biyolojik numunelerde mevcut olabilir.
Multiplex Digital PCR, inhibitörlere karşı daha toleranslıdır. Numune birçok küçük reaksiyona bölündüğünden inhibitörlerin etkisi seyreltilir. Bazı bölümler inhibitörlerden etkilense bile etkilenmeyen bölümler yine de hedef DNA'nın doğru miktarının belirlenmesini sağlayabilir. Bu, Multiplex Dijital PCR'yi karmaşık örnekleri analiz etmek için daha sağlam bir teknik haline getirir.
Uygulamalar
Multiplex Dijital PCR ile geleneksel PCR arasındaki farklar aynı zamanda farklı uygulamalara da yansır. Geleneksel PCR, gen klonlama, genotipleme ve temel gen ekspresyon analizi gibi rutin moleküler biyoloji uygulamalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. DNA'nın tespit edilmesi ve çoğaltılması için uygun maliyetli ve nispeten basit bir tekniktir.
Multiplex Digital PCR ise özellikle yüksek hassasiyet ve hassasiyet gerektiren uygulamalarda kullanışlıdır. Örneğin kanser araştırmalarında tümör numunelerindeki nadir somatik mutasyonları tespit etmek için kullanılabilir. Bulaşıcı hastalık tanısında klinik örneklerdeki düşük seviyeli patojenleri tespit etmek için kullanılabilir. Çevresel izlemede, su veya toprak numunelerindeki mikroorganizmaları tespit etmek ve ölçmek için kullanılabilir.
Multipleks Dijital PCR Çözümlerimiz
Multiplex Dijital PCR çözümlerinin tedarikçisi olarak müşterilerimizin farklı ihtiyaçlarını karşılamak için yüksek kaliteli bir ürün yelpazesi sunuyoruz. BizimD3200 Damlacık Dijital PCR Sistemi (Yalnızca Çin)doğru ve güvenilir dijital PCR sonuçları sağlayan son teknoloji ürünü bir cihazdır. Aynı anda birden fazla numunenin analizine olanak tanıyan yüksek verimli bir tasarıma sahiptir.
AD3207 Otomatik Damlacık Dijital PCR Sistemidijital PCR iş akışını kolaylaştıran otomatik bir çözümdür. Uygulamalı zamanı ve insan hatasını azaltarak, onu yüksek hacimli laboratuvarlar için ideal hale getirir.
BizimPilot1200 Hepsi Bir Arada Dijital PCR Cihazıdijital PCR analizi için gerekli tüm fonksiyonları birleştiren kompakt ve kullanıcı dostu bir araçtır. Hem araştırma hem de klinik uygulamalar için uygundur.
Çözüm
Sonuç olarak Multiplex Dijital PCR, geleneksel PCR'ye göre daha yüksek hassasiyet, daha iyi hassasiyet, çoğullama kapasitesi ve inhibitörlere karşı daha fazla tolerans dahil olmak üzere çeşitli avantajlar sunar. Bu özellikler onu moleküler biyoloji, tıp ve çevre bilimlerindeki geniş bir uygulama yelpazesi için güçlü bir araç haline getirmektedir.
Multiplex Dijital PCR çözümlerimiz hakkında daha fazla bilgi edinmek istiyorsanız veya özel ihtiyaçlarınızı görüşmek istiyorsanız, satın alma danışmanlığı için bizimle iletişime geçmenizi öneririz. Uzmanlardan oluşan ekibimiz, araştırma veya teşhis gereksinimleriniz için en iyi çözümü bulmanızda size yardımcı olmaya hazırdır.
Referanslar
- Hindson, BJ, Ness, KD, Masquelier, DA, Belgrader, P., Heredia, NJ, Makarewicz, AJ, … & Efcavitch, JW (2011). DNA kopya numarasının mutlak miktarının belirlenmesi için yüksek verimli damlacık dijital PCR sistemi. Analitik kimya, 83(22), 8604 - 8610.
- Vogelstein, B. ve Kinzler, KW (1999). Dijital PCR. Ulusal Bilimler Akademisi Bildirileri, 96(16), 9236 - 9241.
- Pinheiro, JB ve Scherer, SE (2012). Dijital PCR: Daha hassas moleküler teşhis için yeni ortaya çıkan bir teknoloji. Moleküler teşhisin uzman incelemesi, 12(5), 507 - 516.
